Técnicas de PCR en el diagnóstico de el SARS-CoV-2

TEMA: Método diagnóstico de la mutación D614G en el SARS-CoV-2.

OBJETIVOS: Optimización y mejora del método PCR-RFLP para la detección de D614G en el SARS-CoV-2.

MUESTRA BIOLÓGICA: Hisopado nasal

TIPO DE ÁCIDO NUCLEICO A SER EXTRAÍDO: ARN viral a ADNc mediante síntesis a temperatura de 50° durante 30 minutos.

GEN O SECUENCIA A AMPLIFICAR: (590 pb

)Gen codificante de la proteína S, D614G

TIPO DE PCR: PCR-RFLP

Pasos:

- Desnaturalización primaria: 95 ºC - 10 minutos

- Desnaturalización: 95 ºC - 30 segundos

- Alineamiento: 60 ºC - 30 segundos

- Extensión: 72ºC - 60 segundos

VISUALIZACIÓN: Electroforesis; gel de agarosa al 1,5%.

Referencias bibliográficas: 

1. Hashemi SA, Khoshi A, Ghasemzadeh-moghaddam H, Ghafouri M, Taghavi M, Namdar-Ahmadabad H, et al. Development of a PCR-RFLP method for detection of D614G mutation in SARS-CoV-2. Infect Genet Evol [Internet]. 2020 [Consultado 17 dic 2023];86(104625):104625. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1567134820304561