Terapia Epigenómica en el Cáncer de pulmón

Tema: Terapia epigenética en el Cáncer de pulmón de células no pequeñas con el uso de HDACi.

Mecanismo epigenómico tratado: Inhibición de la desacetilación de histonas.

Cómo se lo hizo: Se administró Ácido valproico, un inhibidor de las histonas desacetilasas (HDACi), en células del cáncer de pulmón A549. Esto permitió la expresión de Nm23-H1 que es un gen supresor de tumores, para regular la proliferación de las células.

Resultados: Alteración de procesos vitales para la célula cancerosa de pulmón: proliferación y apoptosis celular y sobre todo en la angiogénesis. La citotoxicidad del VPA inhibe el crecimiento de las células cancerosas de pulmón.

Imagen muestra la viabilidad celular respecto a la concentración de Ácido valproico.

Referencias bibliográficas:

1. Kalantar H, Rashidi M, Kalantar M, Tavallaei M, Hosseini SM. Anticancer effects of valproic acid via regulation of epigenetic mechanisms in non-small-cell lung cancer A549 cell line. Iran J Pharm Res [Internet]. 2021 [citado el 25 de febrero de 2024];20(1):133–40. Disponible en: https://brieflands.com/articles/ijpr-124473

Técnica de Edición de ácidos nucleicos en la β-Talasemia

Tipo de Edición: In vivo; somática

Dirigido hacia: Gen HBA2 

Dirigido por: Enzima recombinada del CRISP-Cas9, además de que se hizo uso de plásmidos de ADN

Órgano a tratar: Médula ósea

Vía de administración: Inyección intravenosa

Resultados: A corto plazo la eliminación del gen mutante HBA2 reduce los niveles de la α-globina redundando en una mejoría en los pacientes con talasemia. A mediano y largo plazo se logra mantener la potencialidad del multilinaje. Mejoría del fenotipo de los pacientes.

Obtenido de: https://ashpublications.org/bloodadvances/article/5/5/1137/475292/Correction-of-thalassemia-by-CRISPR-Cas9-editing

Referencias bibliográficas: 

1. Pavani G, Fabiano A, Laurent M, Amor F, Cantelli E, Chalumeau A, et al. Correction of β-thalassemia by CRISPR/Cas9 editing of the α-globin locus in human hematopoietic stem cells. Blood Adv [Internet]. 2021 [citado el 19 de febrero de 2024];5(5):1137–53. Disponible en: https://doi.org/10.1182/bloodadvances.2020001996

Terapia Con Stem Cells en el Infarto Agudo al Miocardio

 

Tema: Terapia regenerativa dual en la aplicación de células madre mesenquimatosas en el tratamiento del infarto agudo al miocardio.

Tipo de Stem Cell: Células madre mesenquimatosas derivadas de la medula ósea (MSC) y ECFC.

Método de obtención: Obtención de células madre mesenquimatosas por aspiración de médula ósea, con el consecuente aislamiento de células mononucleares mediante el uso del gradiente de densidad Ficoll. El cultivo de las células se llevó a cabo en placas de cultivo tratados con gelatina en el medio Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM).

Vía de administración: Inyección intramiocardica con MSC y ECFC en proporción de 9:1 al ser terapia regenerativa dual.

Resultados: La mejora de la cicatrización del tejido del miocardio y del gasto cardíaco. El co-transplante de las MSC aumenta la funcionalidad del corazón infartado. Las MSC y ECFC demostraron la secreción de sustancias con propiedades proangiogénicas.

Obtenido de: https://www.mdpi.com/cells/cells-10-00054/article_deploy/html/images/cells-10-00054-g002-550.jpg

Referencias bibliográficas:

1. Popescu S, Preda MB, Marinescu CI, Simionescu M, Burlacu A. Dual stem cell therapy improves the myocardial recovery post-infarction through reciprocal modulation of cell functions. Int J Mol Sci [Internet]. 2021 [citado el 11 de febrero de 2024];22(11):5631. Disponible en: https://www.mdpi.com/1422-0067/22/11/5631

Ejemplo de ADN recombinante artificial en la tuberculosis; Ejemplo de ácidos nucleicos recombinantes en la naturaleza

 Ejemplo de ADN recombinante artificial en la tuberculosis (1)

T: Clonación del gen Rv1980c del Mycobacterium tuberculosis para obtener proteínas recombinantes de MPT64.

O: Obtención proteínas recombinantes para el tratamiento de la tuberculosis y prevenir epidemias.

G: Gen Rv1980c que codifica para la proteína MPT64 (687pb)

ER: BamHI, HindIII

EL: Enzima de ADN ligasa T4

V: pGEM-T Easy

CR: Procariota: E. coli BL-21

MTG: Transformación usando el método de shock por calor a 42°C por 90 segundos

MIC: Electroforesis en gel de agarosa, cultivo celular, screening de PCR de colonias

Imagen obtenida de: https://iopscience.iop.org/article/10.1088/1742-6596/1341/3/032010/pdf

Ejemplo de Ácidos Nucleicos recombinantes en la naturaleza (2)

Transferencia de ADN unidireccional con bacterias de diferentes cepas por conjugación. 

               

Imagen obtenida de: https://www.deanza.edu/faculty/heyerbruce/b6b_pdf/Conjugation%20Lab.pdf

Referencias bibliográficas: 

1. Ahmad A, Agus R, Massi MN, Handayani I, Karim H. Cloning and expression of recombinant protein CFP21 from Mycobacterium tuberculosis as a tuberculosis vaccine candidate. J Phys Conf Ser [Internet]. 2019;1341(3):032011. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1088/1742-6596/1341/3/032011

2. Schneider CL. Bacteriophage-Mediated Horizontal Gene Transfer: Transduction. En: Bacteriophages. Cham: Springer International Publishing; 2021. p. 151–92. Disponible en: https://link.springer.com/content/pdf/10.1007/978-3-319-41986-2_4.pdf

Uso de Northern Blotting en la detección y análisis del HIV

El VIH-1 tiene varios elementos promotores que regulan su actividad y expresión; el YY1, que se trata de un factor de transcripción, puede llegar a regular la infección latente y la expresión génica del VIH-1. Con el uso de la técnica del Northern blotting se estudian todos los derivados del ARNm del VIH-1, tales como los no empalmados, empalmados simples y empalmados múltiples, para evidenciar una mayor producción en las células que sobreexpresan el YY1.

Figura 1: (B) Muestra el uso de el northern blotting en el ARNm del VIH-1.

Referencias bibliográficas:

1. Yu KL, Jung YM, Park SH, Lee SD, You JC. Human transcription factor YY1 could upregulate the HIV-1 gene expression. BMB Rep [Internet]. 2020;53(5):248–53. Disponible en: http://dx.doi.org/10.5483/bmbrep.2020.53.5.222

Técnicas de PCR en el diagnóstico de el SARS-CoV-2

TEMA: Método diagnóstico de la mutación D614G en el SARS-CoV-2.

OBJETIVOS: Optimización y mejora del método PCR-RFLP para la detección de D614G en el SARS-CoV-2.

MUESTRA BIOLÓGICA: Hisopado nasal

TIPO DE ÁCIDO NUCLEICO A SER EXTRAÍDO: ARN viral a ADNc mediante síntesis a temperatura de 50° durante 30 minutos.

GEN O SECUENCIA A AMPLIFICAR: (590 pb

)Gen codificante de la proteína S, D614G

TIPO DE PCR: PCR-RFLP

Pasos:

- Desnaturalización primaria: 95 ºC - 10 minutos

- Desnaturalización: 95 ºC - 30 segundos

- Alineamiento: 60 ºC - 30 segundos

- Extensión: 72ºC - 60 segundos

VISUALIZACIÓN: Electroforesis; gel de agarosa al 1,5%.

Referencias bibliográficas: 

1. Hashemi SA, Khoshi A, Ghasemzadeh-moghaddam H, Ghafouri M, Taghavi M, Namdar-Ahmadabad H, et al. Development of a PCR-RFLP method for detection of D614G mutation in SARS-CoV-2. Infect Genet Evol [Internet]. 2020 [Consultado 17 dic 2023];86(104625):104625. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1567134820304561

Alteración de la epigenética en el Cáncer de próstata

Al afectarse procesos como la metilación de la citidina en la región promotora del gen GSTP1, habría pérdida de codificación de enzimas importantes en la protección del ADN. Efecto del daño en la regulación de los patrones de expresión.

Obtenido de: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/core/lw/2.0/html/tileshop_pmc/tileshop_pmc_inline.html?title=Click%20on%20image%20to%20zoom&p=PMC3&id=8350251_tau-10-07-3104-f1.jpg

Referencias bibliográficas:

1. Conteduca V, Hess J, Yamada Y, Ku S-Y, Beltran H. Epigenetics in prostate cancer: clinical implications. Transl Androl Urol [Internet]. 2021 [consultado 10 dic 2023];10(7):3104–16. Disponible en: http://dx.doi.org/10.21037/tau-20-1339